CRISPR sgRNA文库合成
研究基因在代谢通路或某些特定疾病发生过程中的功能，对于疾病机理研究及药物研发具有非常重要的意义。新一代基因编辑技术CRISPR以其操作简单和通用的独特优势，成为开展正向遗传学筛选实验强有力的工具。利用CRISPR技术建立可能与某类功能相关的突变体库，通过功能性筛选和富集、PCR扩增及深度测序分析，确认与这类功能相关的基因。
九游会J9科技利用独创的“GPS”（Genotype，Phenotype，Synotype）平台，提供基于CRISPR sgRNA文库的一站式基因功能筛选服务。我们专利的Syno®合成技术平台，可以快速高效地实现sgRNA文库构建，并包装成慢病毒混合文库后转染细胞。结合高通量/高内涵筛选平台，利用控制细胞存活、结合免疫染色、流式细胞术等手段筛选得到所需细胞，最终通过测序等方法推断出发挥作用的靶基因。
CRISPR sgRNA文库合成技术路线图
CRISPR基因编辑平台一体化服务流程
九游会J9CRISPR sgRNA文库构建服务优势
- 丰富的全基因组sgRNA设计经验，覆盖几十种模式物种，亦可针对客户需求的模式物种进行sgRNA设计。
- 根据客户自身需求选择sgRNA表达载体，并提供转染级质粒。
- 行业内领先的QC指标。
- 提供从sgRNA设计、文库构建到慢病毒包装的一站式服务。
CRISPR sgRNA文库合成和构建服务
九游会J9科技CRISPR一站式基因编辑服务包括sgRNA序列设计、文库构建、NGS验证、慢病毒包装等，为客户提供基因功能筛选全套解决方案。
| 服务项目 | 服务详情 | 周期 |
|---|---|---|
| sgRNA设计 | 针对特定基因分类进行gRNA序列设计 每个基因设计3-6条sgRNA |
1-2周 |
| 芯片合成 | 将所设计的所有sgRNA及阴性对照合成在一张芯片上 | 3-4周 |
| sgRNA文库构建 | 将sgRNA构建到客户的目标载体上 | 2-3周 |
| 文库质粒大抽 | 根据发货量进行转染级质粒抽提 | 1周 |
| 文库质检及NGS验证(可选) |
|
2-3周 |
| 病毒包装(可选) | 慢病毒包装，病毒滴度: 108TU/ml | 2-3周 |
| 总计 | 11-16周 |
CRISPR sgRNA文库构建与筛选应用实例
【经典案例】已知药物功能筛选其耐药靶点的方案：
Genome-Scale CRISPR-Cas9 Knockout Screening in Human Cells Ophir Shalem et al. Science 343, 84 (2014)
- 明确该药物功能及其致死工作浓度。
- 构建 CRISPR-Cas9 gRNA慢病毒文库并侵染细胞，构建整合CRISPR-Cas9 gRNA的细胞混合克隆。
- 筛选：高浓度药物短期内持续作用细胞混合克隆，成活的细胞即为产生耐药性的细胞，其耐药性的产生原因是 CRISPR-Cas9 gRNA导致的基因改变。
- 存活的细胞通过二代测序，比对得到gRNA 信息，从而推断出起作用的基因靶点。
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