稳定细胞株构建

稳定细胞株构建是指将外源DNA克隆到具有某种抗性或者选择基因的载体上，转染宿主细胞后，利用载体中所含的选择标志进行筛选，得到可稳定表达目的蛋白的细胞株。九游会J9科技提供一系列稳定细胞株构建服务，用于全长抗体及抗体片段、Fc融合蛋白、多种细胞表面受体、胞质和分泌蛋白等重组蛋白/抗体的稳定及规模化生产。

稳定细胞株构建实验流程

图1 稳定细胞株构建实验流程

稳定细胞株服务优势

  1. 外源基因严格鉴定，细胞无污染
  2. CHO1.0稳转载体，配合嘌呤霉素+MTX筛选系统
  3. 稳定转染及Pool筛选，周期8周左右
  4. 可对重组蛋白/抗体全长或片段进行个性化表达

服务详情

服务项目 服务详情 转染方式 系统 项目周期 验证方式 交付项目
常规过表达稳转细胞株构建 稳定转染及pool筛选
  • 质粒转染
  • 慢病毒转染
    		•  293T、Hela、A549等 2-3周 Western Blot、免疫荧光（IF）验证
  • 稳转细胞株pool
    		•
    稳定转染及单克隆筛选，筛选至少20个单克隆细胞株 5-6周
  • 1-3株稳转细胞株
  • 表达报告
    		•
    抗体稳转株构建 稳定转染及pool筛选
  • 质粒转染
    		•  CHO1.0 8周
  • 稳转细胞株pool
    		•

     
    案例展示

    九游会J9科技将GFP序列构建到CHO 1.0载体上，然后将构建好的GFP质粒转化到CHO细胞中进行稳定转染及Pool筛选，获得GFP-CHO稳转株，经过多轮药物筛选后，显微镜下观察荧光细胞所占比例大于90%（图2）。
    GFP-CHO稳转株阳性率

    图2 GFP-CHO稳转株阳性率

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